ElabscienceL-乳酸(LA)比色法測(cè)試盒適用于檢測(cè)血清（漿）、細(xì)胞上清、組織、細(xì)胞等樣本中乳酸的含量。以氧化型輔酶Ⅰ（NAD+）為氫受體，乳酸脫氫酶（LDH）催化乳酸脫氫產(chǎn)生丙酮酸，使 NAD+轉(zhuǎn)化為還原型輔酶Ⅰ（NADH）。其中 N-甲基吩嗪甲基硫酸鹽（PMS）遞氫使氯化硝基四氮唑藍(lán)（NBT）還原為紫色呈色物，呈色物的吸光度在 530 nm 時(shí)與乳酸含量呈線性關(guān)系。本試劑盒檢測(cè)組織和細(xì)胞樣本時(shí)，需測(cè)定總蛋白濃度，推薦使用 BCA 法

樣本準(zhǔn)備：

① 樣本處理

血清血漿等液體樣本：可直接測(cè)定。

組織樣本：常規(guī)勻漿處理(生理鹽水(0.9% NaCl 溶液)或 PBS(0.01 M，pH 7.4)。勻漿后，4℃，10000×g離心10 min，取上清置于冰上待測(cè)。留取部分上清用于蛋白濃度測(cè)定。

細(xì)胞樣本：取106細(xì)胞加入300μL生理鹽水(0.9% NaCl溶液)或PBS(0.01 M，pH 7.4)進(jìn)行勻漿。勻漿后，4℃，10000×g離心10 min，取上清置于冰上待測(cè)。留取部分上清用于蛋白濃度測(cè)定。

② 樣本的稀釋

在正式檢測(cè)前，需選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，結(jié)合本試劑盒的線性范圍：0.12-7.0 mmol/L。

操作步驟：

① 標(biāo)準(zhǔn)孔：取5μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，加入到對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)孔中；

樣本孔：取5μL待測(cè)樣本，加入到樣本孔中。

② 向①中各孔加入100μL酶工作液。

③ 向②中各孔加入20μL試劑三。

④ 37℃條件下孵育10 min。

⑤ 向標(biāo)準(zhǔn)、測(cè)定各孔中加入180μL 試劑四。

⑥ 酶標(biāo)儀上振蕩 5 s，酶標(biāo)儀530 nm處，測(cè)定各孔OD值。

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