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RNA提取準備工作及注意事項有什么?
2023-11-01
你知道RNA提取準備工作及注意事項都有什么嗎?讓我們一起來看看吧!一、槍頭和EP管等的消毒滅菌1.用去離子水配制0.1%(千分之一)的DEPC(劇毒物),須在通風櫥中小心使用,避光密閉4℃保存;DEPC水是用DEPC處理過并經(jīng)高溫高壓消毒的純水。經(jīng)檢測不含RNase、DNase和proteinase。2.將槍頭和EP管放入0.1%的DEPC內(nèi),保證槍頭和EP管內(nèi)都充滿0.1%的DEP。3.避光、靜置、過夜(12-24h)4.裝槍頭和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡,將槍頭或者...
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如何配置培養(yǎng)基?
2023-10-31
你知道該如何配置培養(yǎng)基嗎?讓我們一起來看看吧!一、細胞實驗全程注意事項1.無菌操作是重中之重,細胞培養(yǎng)對無菌條件比較苛刻,實驗人在進行整個細胞實驗的無菌意識一定要強,否則一個不小心,發(fā)生細菌污染,輕則浪費細胞,重則污染整個培養(yǎng)箱。2.實驗人員進入細胞房前應(yīng)該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。3.所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進行消毒,雙手進入工作臺前也需要用75%的酒精進行消毒。4.進行實驗前應(yīng)先對工作臺進行紫外滅菌30min以上,并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一...
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如何選擇合適的培養(yǎng)基?
2023-10-31
培養(yǎng)細胞的重要環(huán)節(jié)有很多,其中很重要的一步就是為細胞選擇適合的生長環(huán)境,為其選擇成分適合又營養(yǎng)豐富的細胞培養(yǎng)基。細胞培養(yǎng)基是供給細胞營養(yǎng)、維持細胞生長和增殖的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物,種類一般包括經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)基以及化學成分確定的培養(yǎng)基等。那么該如何選擇合適的培養(yǎng)基呢?讓我們一起來看看吧!1.RPMI-1640培養(yǎng)基RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動物、特殊造血細胞、正常或惡性增生的白細胞,雜交瘤細胞的培養(yǎng),是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細胞培養(yǎng)。其它像K...
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影響WB實驗的因素有什么?
2023-10-30
WB實驗是分子生物學中最為常見的實驗,那么你知道影響WB實驗的因素有什么嗎?讓我們一起來看看吧!一、蛋白樣本制備1.蛋白質(zhì)的樣品制備注意以下問題:(1)在合適的條件下,保持蛋白質(zhì)的最大溶解性和可重復(fù)性。(2)選擇合適的表面活性劑和還原劑,使其形成各自多肽的溶液。(3)盡量去除核酸,多糖,脂類等分子的干擾,裂解完畢離心之后取中層澄清溶液時避免吸到底層沉淀和上層脂類。(4)整個制作蛋白樣本的制備過程必須在低溫下進行,避免細胞破碎釋放出各種酶類,但是注意不要反復(fù)凍融。(5)所抽取樣...
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DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同?
2023-10-30
培養(yǎng)基有很多不同的名字是因為根據(jù)不同細胞的培養(yǎng)和應(yīng)用場景,培養(yǎng)基可以分為多種類型,最常見的是DMEM、RPMI-1640、MEM等。這些培養(yǎng)基有自己的配方特點和適用范圍。那么你知道DMEM和1640培養(yǎng)基有哪些不同嗎?讓我們一起來看看吧!DMEM(Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium)是一種zui廣泛應(yīng)用的細胞培養(yǎng)基之一,它是由Eagle于1959年開發(fā)出來的,后由Dulbecco進行了改良。DMEM主要適用于肝臟、腎臟、肺、心臟等多種類型的哺乳動物...
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細胞培養(yǎng)實驗常見問題有哪些?
2023-10-27
你知道細胞培養(yǎng)實驗常見問題有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!一、細胞污染和感染的處理方法細菌污染:如發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)物出現(xiàn)混濁或異味,可能存在細菌污染。立即停止細胞培養(yǎng),對細胞培養(yǎng)器具進行嚴格的消毒和清潔,更換新的細胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基。真菌污染:真菌污染常常表現(xiàn)為細胞培養(yǎng)物表面的白色或黑色斑點。細胞培養(yǎng)器具應(yīng)che底清潔,細胞培養(yǎng)物可以添加抗真菌劑來預(yù)防和處理。細胞病毒感染:如發(fā)現(xiàn)細胞培養(yǎng)物出現(xiàn)明顯的細胞溶解和變形,可能存在細胞病毒感染。可使用抗病du藥物來處理感染,并且進行核酸檢測以...
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什么是液體培養(yǎng)基?它的組分有哪些?
2023-10-26
細胞培養(yǎng),是人工創(chuàng)造與體內(nèi)生長相似的環(huán)境,使細胞生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。培養(yǎng)基是一切體外培養(yǎng)的基礎(chǔ),為細胞的生長和代謝活動提供了各種必需的營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)培養(yǎng)基的來源和組成成分,它的發(fā)展經(jīng)歷了三個階段,分別是天然培養(yǎng)基階段、合成培養(yǎng)基階段以及無血清培養(yǎng)基階段。那么你知道什么是液體培養(yǎng)基嗎?它的組分是什么嗎?讓我們一起來看看吧!在20世紀50年代,當時體外培養(yǎng)普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液,如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等,這就是天然培養(yǎng)基階段。由...
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液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些?
2023-10-26
液體培養(yǎng)基是最為常見的培養(yǎng)基類型,它具有可進行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢,因為它的流動性便于精確控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營養(yǎng)濃度和氣體含量等;它對細胞生長時的附著能力要求小,細胞可快速擴增;當需要大量細胞培養(yǎng)時也更經(jīng)濟高效。那么你知道液體培養(yǎng)基的常見問題有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!一、液體培養(yǎng)基為什么顏色不一樣酚紅加量不同,導(dǎo)致顏色差異:DMEM>MEM>DMEM/F12>RPMI1640>F12&F10。二、培養(yǎng)基放冰箱里顏色變深空氣中CO2濃度低,培養(yǎng)基內(nèi)CO2會逐漸溢出,...