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蛋白質(zhì)定量有哪些方法？

2023-08-22 蛋白定量是蛋白分離和分析前必須的一個重要步驟，蛋白色譜分離、蛋白質(zhì)電泳分析、蛋白質(zhì)免疫分離和分析、細(xì)胞裂解釋放的總蛋白定量、蛋白分子的標(biāo)記、蛋白結(jié)構(gòu)分析等，都需要可靠的定量分析作為基礎(chǔ)。蛋白定量分析應(yīng)用的領(lǐng)域包括生物科學(xué)，食品檢驗(yàn)，臨床檢驗(yàn)等等。蛋白質(zhì)定量有哪些方法？讓我們一起來看看吧！一、比色法蛋白定量常使用的方法是比色法，通常用于總蛋白的定量分析。根據(jù)蛋白和比色試劑的結(jié)合，可以將比色法分為：蛋白-染料結(jié)合法和蛋白-銅螯合化學(xué)試劑法。前者對應(yīng)的典型蛋白定量比色法是考馬斯亮藍(lán)...

WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣

2023-08-21 在做Westernblot實(shí)驗(yàn)時，你一定會遇到各式各樣的條帶，最常見的就是條帶跑歪了，如凹型條帶、凸型條帶、斜條帶、條帶拖尾等。如何更好的做好WB實(shí)驗(yàn)，讓我們一起來看看WB實(shí)驗(yàn)中條帶不跑歪的秘訣吧！一、凹凸條帶的原因和解決辦法可能原因：可能是由于膠未配好（凝膠未能wan全聚合，膠中有顆粒或氣泡，凝膠未冷卻好，），也可能是電壓過高。解決方法：正確添加質(zhì)量合格且未過期的AP及TEMED；過濾配膠的試劑保證配膠過程中膠內(nèi)無氣泡；凝膠冷卻好后再上樣；降低電壓。二、條帶出現(xiàn)黑點(diǎn)或黑斑的...

Q-pcr 和 RT-pcr 有啥區(qū)別？

2023-08-21 Q-PCR和RT-PCR都是分子生物學(xué)中常用的技術(shù)，用于檢測和定量特定的核酸序列。Q-pcr和RT-pcr有啥區(qū)別？它們的原理和應(yīng)用類型相同嗎？今天讓我們一起來了解一下吧！一、Q-pcr和RT-pcr原理上的不同Q-PCR也是基于PCR的技術(shù)，但它引入了熒光探針或熒光染料來實(shí)時監(jiān)測PCR反應(yīng)的進(jìn)程。熒光信號的強(qiáng)度與目標(biāo)序列的數(shù)量成正比，因此可以定量地測量起始樣品中的目標(biāo)核酸數(shù)量。RT-PCR結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄（ReverseTranscription）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的過...

PolyPlus轉(zhuǎn)染試劑jetPRIME®產(chǎn)品問題匯總

2023-08-18 問題一：化合物Q：INTERFERin®是什么類型的化合物？A：INTERFERin®是新一代的非脂質(zhì)體陽離子兩性分子轉(zhuǎn)染試劑，專為培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞的siRNA轉(zhuǎn)染而開發(fā)。使用INTERFERin®，加入1nM的siRNA就能達(dá)到90%以上的沉默效率。問題二：細(xì)胞Q:INTERFERin®已成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系有哪些？A:INTERFERin®已被成功用于多種貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞系，例如HeLa，HEK-293,A549MDA-MB-23...

CRISPR Cas9酶是一種基因編輯工具

2023-08-18 CRISPRCas9酶是一種基因編輯工具，用于修改生物體的基因組。CRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats)是一種存在于細(xì)菌和古細(xì)菌中的一類DNA序列，而Cas9(CRISPR-associatedprotein9)是CRISPR系統(tǒng)中的一種酶。從細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的一種天然的免疫系統(tǒng)，用于抵御病毒入侵。它通過記錄病毒的DNA片段，并將其整合到自身的基因組中，形成CRISPR序列。當(dāng)同一病毒再次入侵時，CR...

原代細(xì)胞如何獲取？

2023-08-17 原代細(xì)胞(primarycell)：是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞的獲取難度大、需要考慮的問題多，原代細(xì)胞如何獲取？原代細(xì)胞的獲取，就是從活體上將組織分解成單個細(xì)胞再進(jìn)行培養(yǎng)的過程，且整個過程要求無菌操作。具體要考慮的問題有：組織分解的方式，培養(yǎng)的時間，換液時間，細(xì)胞狀態(tài)判斷和凍存。一、...

懸浮細(xì)胞如何進(jìn)行傳代培養(yǎng)？

2023-08-16 懸浮細(xì)胞傳代是一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)操作,它可以幫助研究人員擴(kuò)增和維持細(xì)胞株。懸浮細(xì)胞如何進(jìn)行傳代呢？一、懸浮細(xì)胞的傳代懸浮細(xì)胞傳代比貼壁細(xì)胞傳代稍微簡單一些。由于細(xì)胞已經(jīng)在生長培養(yǎng)基中懸浮，因此無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個過程較為迅速，對細(xì)胞的損傷也較小。懸浮生長細(xì)胞的傳代培養(yǎng)要比貼壁細(xì)胞簡單得多，通常有兩種方法。1.直接給帶傳代的培養(yǎng)瓶中補(bǔ)充一定量的新鮮.培養(yǎng)基，然后將進(jìn)行分裝。2.先通過離心棄掉營養(yǎng)匱乏的舊培養(yǎng)基，然后再用適量的新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，最后將其分...

貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代培養(yǎng)？

2023-08-15 隨著CAR-T治療的火熱，細(xì)胞和基因治療也進(jìn)入了白re化的狀態(tài)，細(xì)胞培養(yǎng)就稱為通向CAR-T治療的第一步。貼壁細(xì)胞如何進(jìn)行傳代培養(yǎng)？讓我們一起來看看吧！一、所需材料★裝有貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)容器★經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板或培養(yǎng)★wan全生長培養(yǎng)基，預(yù)熱至37℃★一次性無菌15ml試管★37℃培養(yǎng)箱，充有二氧化碳濃度為5%的濕化空氣★平衡鹽溶液，例如:杜爾貝科磷酸鹽緩沖液(DPBS)，不含鈣、鎂和酚紅消化酶，例如：胰蛋百酶，不含酚紅二、貼壁細(xì)胞傳代流程細(xì)胞培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)...