細胞培養的一般過程

2024-09-26 一、準備工作準備工作對開展細胞培養異常重要，工作量也較大，應給予足夠的重視，推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養箱及其他儀器的檢查與調試。二、取材在無菌環境下從機體取出某種組織細胞（視實驗目的而定），經過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的shou次培養稱為原代...

RNA酶保護試驗方法優缺點

2024-09-26 一、工作原理RNA酶保護法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下簡稱RPA），是近十年發展起來的一種全新的mRNA定量分析方法?；驹恚簩擞浀奶禺怰NA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合，形成雙鏈RNA；未結合的單鏈RNA經RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特異RNA探針結合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護實驗。二、RPA法優...

選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關重要

2024-09-26 新生牛血清是從出生0天至1周內或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于細胞培養和疫苗生產等生物制藥領域。在選購時應該關注血源的可追溯性、質量認證以及適用性；操作時應注意血清的采集、儲存條件和逐步適應訓練等。新生牛血清的選購指南：1.血源可追溯性：選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關重要。市面上存在較多以假亂真的產品，因此科研工作者需要對血清的真實產地、來源進行充分了解和鑒別。2.質量認證：通過嚴格的質量控制和多項性能測試。例如，某些特優級胎牛血清會有多達70項質量測試，...

生物制藥中殘留DNA檢測試劑盒推薦

2024-09-25 一、前言生物制藥是利用生物技術從組織、細胞等生物體中分離出有效成分后制備出的用于預防、治療和診斷的制品，如疫苗，重組蛋白藥等。目前，已開發出多種生產用的細胞系，如CHO細胞、大腸桿菌、VERO細胞等細胞系。然而這些通過大腸桿菌，CHO細胞等培養生產的生物制劑會含有宿主細胞殘留DNA等特定的雜質，殘留DNA會引發潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或導致突變），所以相關的法律法規相繼出臺，以對生物制品中外源宿主DNA殘留量進行嚴格把控。如WHO和美國FDA現行...

大腸桿菌感受態細胞（E.coli DH5α）制備

2024-09-25 一、DH5αDH5α是大腸桿菌(Escherichiacoli)的一種感受態細胞系，通常被用于分子生物學實驗中。這些細胞被設計成對外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉化和質粒擴增等實驗中被廣泛使用。DH5α感受態細胞對于吸收外源DNA特別有效，這使得它們在基因工程和分子生物學研究中成為常見的實驗室工具。二、操作步驟1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養基中37℃搖床培養過夜（約16小時）；2、取1ml過夜培養物轉接于100mlLB培養基中，...

BCA法實驗原理、操作步驟

2024-09-25 一、實驗原理BCA(bicinchoninicacid,二辛可酸)法，測定蛋白質即在堿性條件下蛋白質與Cu2+絡合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應，使其由原來的蘋果綠形成穩定的紫藍色復合物，在562nm有強烈的光吸收，且吸光值和蛋白質濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系，因此可用于蛋白質濃度測定。?二、操作步驟準備標準品和樣品?：將標準蛋白質溶液（如牛血清白蛋白BSA）稀釋成一系列已知濃度的溶液，作為標準曲線。同時，將待測樣品適當稀釋，確保其在標準曲線的線性范圍內...

植物組織蛋白質提取方法

2024-09-25 方法一：1.根據樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據材料不同適當加入），準備提取液放在冰上。2.樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時）。3.用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4.提取上清夜，樣品制備完成。5.蛋白質提取液：300ml1Mtris-HCl（PH8）45ml甘油（Glycerol）75ml聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g這種方法針對SDS-PAGE，垂...

LNA在基因檢測中的應用

2024-09-24 一、LNA的介紹鎖核酸（Lockednucleicacid，LNA）是一種經過修飾的RNA，LNA中一部分核糖上的2'與4'碳連結在一起。一般可見于A-DNA或RNA。這類核酸可以增加引物或探針（probe）的融解溫度（Tm值），加強這些實驗用物質的穩定性，可應用在即時聚合酶連鎖反應（real-timePCR）等技術中。近期,鎖核酸(lockednucleicacid,LNA)作為一種新穎的核苷酸衍生物在藥學研究領域引起了人們的廣泛關注,有希望成為分子水平治療各種疾病的新突破...